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HCG膠體金免疫層析法

更新時(shí)間:2022-12-20 11:34:28  推薦指數(shù):

  HCG是胚胎絨毛膜合體滋養(yǎng)細(xì)胞合成的一種糖蛋白, 為妊娠的特異性標(biāo)記物,當(dāng)受精卵植入子宮壁后, HCG就開始分泌了。懷孕初期, 母體血清中β-hCG濃度介于5~ 25 mIU/ ml 之間,而隨著孕程的延長,濃度迅速升高,孕6W左右以指數(shù)增長, 孕8- 10W達(dá)峰值, 11- 13W逐漸下降, 達(dá)一定水平后持續(xù)至分娩。健康的未懷孕的人體內(nèi)的濃度應(yīng)低至可能檢測不到,血清中β-hCG濃度應(yīng)小于5 mIU/ m l。

HCG膠體金免疫層析法

  HCG分子結(jié)構(gòu)中含α、β兩個亞基,α亞基結(jié)構(gòu)與卵泡刺激素(FSH)、 黃體生成激素(LH)、 促甲狀腺激素(TSH)的α亞基相似,而β亞基結(jié)構(gòu)具有特異性,故臨床工作中通常通過檢測β-hCG來確定HCG濃度,特異性高,且無交叉反應(yīng),是一種應(yīng)用于產(chǎn)前篩查的血清 標(biāo)志物。

  血HCG、尿HCG

  血液中的HCG經(jīng)尿液排泄,故血HCG、尿HCG之間具有同時(shí)升高或降低的一致性。妊娠婦女中,血清HCG值比尿HCG值普遍要高。在檢測過程中,尿液HCG受干擾因素多,例如飲水量太多導(dǎo)致的濃度稀釋,酒精也可能造成影響,因此血清HCG定量檢測比尿液HCG定量檢測 準(zhǔn)確性更好。故在HCG的檢測工作中,應(yīng)當(dāng)血清標(biāo)本為主,尿液標(biāo)本為輔。

  關(guān)于膠體金免疫層析法(GICA)

  目前臨床上檢測血、尿HCG的方法很多,包括酶聯(lián)免疫法、放射免疫分析、化學(xué)發(fā)光免疫分析方法等等,其中膠體金免疫層析法因具有快速,簡便,不需特殊設(shè)備,便于家庭使用等特點(diǎn)而應(yīng)用廣泛,但不能定量檢測,且靈敏度有限。

  其檢測原理是膠體金雙抗體夾心法:金標(biāo)為鼠源性抗β-hCG單克隆抗體與膠體金的復(fù)合物, 測試線包被羊抗人α-hCG多克隆抗體, 控制線包被羊抗鼠多克隆抗體。

  當(dāng)待測尿液或血清中含有一定量的HCG時(shí), 標(biāo)本通過層析作用到達(dá)金標(biāo)位置HCG的β鏈和單抗β-hCG發(fā)生免疫反應(yīng), 再層析到測試線位置, HCG的α鏈和多抗α-hCG發(fā)生免疫反應(yīng), 這樣就把金標(biāo)通過HCG橋連到測試線上, 達(dá)到一定量后, 金標(biāo)顯色為肉眼可見的水平, 多余的金標(biāo)繼續(xù)泳動到控制線位置, 由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG單抗發(fā)生免疫反應(yīng), 從而橋連膠體金顯色, 這樣就得到陽性結(jié)果。當(dāng)尿液或血清中不含HCG時(shí), 金標(biāo)和測試線抗體不發(fā)生橋連, 而控制線則顯色, 這樣就得到了陰性結(jié)果。當(dāng)控制線未見時(shí),要考慮試紙是否 失效。

  HCG膠體金試驗(yàn)陽性一般表示妊娠,但是異位妊娠,生殖系統(tǒng)疾病如葡萄胎,某些癌癥如支氣管癌等也可分泌HCG而使試驗(yàn)陽性。試驗(yàn)陰性一般表示非妊娠,但是當(dāng)早期妊娠時(shí)間太短,也可能檢測不出。

  引起HCG膠體金免疫層析法假陽性、假陰性的可能原因

  一、引起試驗(yàn)假陽性的因素很多,也有許多不確切因素

  1、交叉反應(yīng)性物質(zhì)的存在,盡管β鏈為HCG所特有, 但與LH仍有部分交叉反應(yīng),容易引起假陽性,因此育齡婦女檢查時(shí)應(yīng)避開排卵期。

  2、某些病理改變也可使HCG含量增高,腦垂體疾病、甲亢、卵巢囊腫,子宮癌等可使HCG實(shí)驗(yàn)陽性。

  3、藥物,EDTA,維生素,pH 值等也能引起干擾

  二、引起HCG假陰性的可能因素

  1、大量飲水、服利尿劑或其他藥物可使HCG濃度下降

  很多病人做b超時(shí)需憋尿,然后刻意喝很多水,再來驗(yàn)?zāi)驎r(shí)會造成HCG濃度的稀釋,導(dǎo)致試紙條驗(yàn)不出,有必要時(shí)可以先查尿再做b超。

  2、檢測試紙敏感性較低

  不同廠家的HCG試紙條敏感性不同,需要尿液中HCG達(dá)到一定濃度才能被測出,如果懷孕初期濃度較低達(dá)不到檢測下限,則可能得出陰性的結(jié)果,如有懷疑,可過段時(shí)間復(fù)查。

  3、孕婦體內(nèi)HCG分泌水平不同,尿HCG濃度略低于血HCG,晨尿HCG水平最高,接近血清水平。故受檢者高度懷疑有受孕可能而尿檢陰性時(shí),建議受檢者做血HCG檢查和b超,仔細(xì)結(jié)合臨床癥狀,可在48-72小時(shí)后重新收集晨尿測定。

  4、關(guān)于HOOK效應(yīng)

  在葡萄胎等妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病中,滋養(yǎng)細(xì)胞高度增生, 產(chǎn)生大量HCG,過量HCG分別與試紙中膠體金標(biāo)記的鼠抗人β-hCG單克隆抗體和羊抗人α-hCG多抗血清結(jié)合, 而不再形成金標(biāo)記的β-hCG抗體-HCG-羊抗人α-hCG多抗夾心復(fù)合物,不再出現(xiàn)陽性結(jié)果, 即鉤狀效應(yīng) 引起的假陰性。

  5、超過MAX線

  注意試紙條插入尿液的深度不能超過試劑條的標(biāo)記線, 避免吸入過量的尿液, 造成HCG 抗原過剩, 引起假陰性結(jié)果。

  6、結(jié)果觀察時(shí)間

  高濃度標(biāo)本可以1min立即出結(jié)果,而低濃度標(biāo)本則需適當(dāng)延長觀察時(shí)間,檢驗(yàn)者最好在5 min 時(shí)觀察結(jié)果得出準(zhǔn)確報(bào)告, 否則可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

  確實(shí),人絨毛膜促性腺激素檢測試紙(膠體金法)是個簡便,易懂,任何人員都可以操作的檢驗(yàn),其對于妊娠或急腹癥的輔助診斷及隨訪都有重要作用。但是大家也要懂得它的局限性所在,也要懂得正確操作的重要性,以及可能引起假陽性,假陰性的因素。

  目前市場上有眾多的HCG檢測試劑條,產(chǎn)品說明書也淺顯易懂,一般人員均能夠使用。但是不同廠家在一些重要指標(biāo)上還是有差異的,例如關(guān)于靈敏度的規(guī)定,試劑穩(wěn)定性的存放,以及結(jié)果觀察時(shí)間等等。無論是醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室還是家庭個人,在選用這些試紙時(shí)要嚴(yán) 格把控質(zhì)量關(guān),也要按照試紙說明書操作進(jìn)行。

  尿HCG 的檢測只能作為輔助診斷手段,診斷妊娠、先兆流產(chǎn)及某些滋養(yǎng)細(xì)胞層疾病, 需結(jié)合臨床癥狀及血清β-HCG、B 超等其他檢測方能作出準(zhǔn)確判斷。

  另外,檢驗(yàn)人員雖然不是臨床醫(yī)生,無法確診某些疾病,但是在臨床工作中,我們也有責(zé)任給病人解釋檢驗(yàn)結(jié)果的臨床意義以及某些檢驗(yàn)方法的局限性和干擾因素等等。檢驗(yàn),并不是每個人都能做的,因?yàn)槲覀兌梅治銮?、中、后的?biāo)本質(zhì)量檢測控制,而這也是 非常重要的。

HCG檢測試劑盒
HCG檢測試劑盒

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