多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是臨床常見的內(nèi)分泌及代謝紊亂性疾病，病因尚不清楚，在育齡婦女中較為高發(fā)，以卵泡發(fā)育障礙、胰島素抵抗和高雄激素血癥為主要特征。PCOS是當(dāng)代生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。當(dāng)PCOS不孕患者經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)促排卵治療仍未妊娠，或合并其他助孕指征，可行體外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕治療。在IVF控制性超促排卵（COH）過程中，常常在卵泡接近成熟時(shí)使用外源性人絨毛膜促性腺激素（hCG）以模擬內(nèi)源性黃體生成素（LH）峰作用，促進(jìn)卵泡最后的成熟，稱為hCG扳機(jī)，因此，hCG扳機(jī)時(shí)間至關(guān)重要。臨床上在至少3個(gè)主導(dǎo)卵泡徑線≥17 mm或者2個(gè)主導(dǎo)卵泡徑線≥18 mm時(shí)考慮行hCG扳機(jī)。扳機(jī)日除了要關(guān)注卵泡直徑還應(yīng)重視成熟卵泡數(shù)量，既要獲得足夠數(shù)量的成熟卵子又不降低卵子質(zhì)量，目前國(guó)內(nèi)外尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。有研究認(rèn)為妊娠率隨著成熟卵泡比例的增加而升高，也有研究認(rèn)為高成熟卵泡比例組卵子發(fā)育潛能反而降低。關(guān)于PCOS患者h(yuǎn)CG注射日成熟卵泡比例對(duì)妊娠結(jié)局的影響研究甚少。2011年Genro等首次提出卵泡輸出率（FORT）的概念，即hCG注射日雙側(cè)卵巢排卵前16~22 mm 卵泡個(gè)數(shù)與促排卵前2~8 mm竇卵泡個(gè)數(shù)的百分比，用于評(píng)估不孕患者卵巢反應(yīng)性及妊娠結(jié)局。在COH周期中，同一批發(fā)育的徑線稍小的卵泡（例如直徑14~16 mm）也可獲得成熟卵母細(xì)胞，hCG注射后這部分卵泡將會(huì)進(jìn)一步發(fā)育成熟，因此本研究采用直徑≥14 mm的卵泡數(shù)計(jì)算hCG注射日成熟卵泡數(shù)占比和FORT，并分析其對(duì)PCOS患者卵泡期長(zhǎng)效長(zhǎng)方案新鮮胚胎移植妊娠結(jié)局的影響，為控制性促排卵的治療提供臨床依據(jù)。
資料與方法
1.研究對(duì)象及分組：回顧性隊(duì)列研究分析2017年5月至2018年5月期間在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心接受卵泡期長(zhǎng)效長(zhǎng)方案新鮮胚胎移植的PCOS患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合鹿特丹診斷標(biāo)準(zhǔn)，診斷為PCOS；②具有IVF/卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射（ICSI）指征；③卵泡期長(zhǎng)效長(zhǎng)方案降調(diào)節(jié)；④hCG扳機(jī)后取卵并行新鮮胚胎移植患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①子宮及卵巢手術(shù)史；②子宮內(nèi)膜異位癥；③子宮腺肌??；④雙側(cè)輸卵管積水；⑤復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)等。根據(jù)hCG注射日直徑≥14 mm卵泡數(shù)占比［（hCG注射日直徑≥14 mm的卵泡數(shù)/hCG注射日卵泡總數(shù)）×100%］分為3組：A組，比例≤60%；B組，比例為60%~80%；C組，比例≥80%。根據(jù)FORT（hCG注射日直徑≥14 mm的卵泡數(shù)/促排卵前竇卵泡總數(shù)×100%）分為3組：D組，比例≤40%；E組，比例為40%~60%；F組，比例≥60%。根據(jù)移植結(jié)局，將患者分為妊娠組及未妊娠組。本研究符合《赫爾辛基宣言》基本原則。
2.COH方案：所有患者均于月經(jīng)周期第2~3日肌內(nèi)注射長(zhǎng)效促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑（GnRH-a，達(dá)菲林，法國(guó)益普生）3.75 mg降調(diào)節(jié)，約于降調(diào)節(jié)30 d查血清激素［卵泡刺激素（FSH）、雌二醇、孕酮、LH］及陰道超聲，若達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)（FSH≤5 IU/L、LH≤5 IU/L、雌二醇<50 ng/L、孕酮<1 µg/L、內(nèi)膜厚度≤5 mm、雙側(cè)竇卵泡直徑≤5 mm），加用促性腺激素（Gn）進(jìn)行COH，每日給予重組FSH（果納芬，瑞士默克雪蘭諾）促卵泡發(fā)育。根據(jù)患者的年齡、基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)（AFC）、生殖激素水平、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）和卵巢功能決定其起始劑量，根據(jù)卵泡發(fā)育情況適時(shí)添加人絕經(jīng)期促性腺激素（hMG，珠海麗珠制藥），根據(jù)卵泡發(fā)育大小及血清LH、雌二醇水平調(diào)整Gn用量和使用時(shí)間。
3.取卵、IVF及胚胎移植：患者雙側(cè)卵巢至少2枚卵泡直徑達(dá)18~20 mm以上時(shí)，結(jié)合雌二醇水平確定“hCG扳機(jī)”時(shí)間，當(dāng)晚皮下注射艾澤（瑞士默克雪蘭諾）250 μg，注射后36~38 h 經(jīng)陰道超聲引導(dǎo)下取卵。取卵當(dāng)日給予黃體支持，黃體酮凝膠（瑞士默克雪蘭諾）1支/d陰道給藥。同時(shí)男方取精，行IVF或ICSI授精，取卵后3~5 d行新鮮胚胎移植。新鮮胚胎移植后14 d檢測(cè)血清β-hCG水平確定是否妊娠，若血清β-hCG≥5 IU/L，則判定為生化妊娠；移植后30~35 d行B超檢查，超聲下見孕囊為臨床妊娠。
4.臨床及實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)指標(biāo)的觀察：患者的一般情況，包括年齡、基礎(chǔ)FSH（bFSH）、BMI、不孕年限和AFC。COH監(jiān)測(cè)指標(biāo)，包括Gn總量、Gn啟動(dòng)量、Gn使用時(shí)間、hCG注射日雌二醇、LH和孕酮水平。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，包括獲卵數(shù)、雙原核（2PN）受精率、可利用囊胚形成率（可利用囊胚為囊胚腔評(píng)分為3期及以上，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或滋養(yǎng)層細(xì)胞其中之一的評(píng)分高于C級(jí)的囊胚）、移植胚胎數(shù)、移植日子宮內(nèi)膜厚度。胚胎移植結(jié)局監(jiān)測(cè)指標(biāo)，包括胚胎種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率、活產(chǎn)率和卵巢過度刺激綜合征（OHSS）發(fā)生率等。2PN受精率=2PN數(shù)/獲卵數(shù)×100%；可利用囊胚形成率=可利用囊胚形成數(shù)/囊胚培養(yǎng)數(shù)×100%；胚胎種植率=超聲見孕囊數(shù)/移植胚胎數(shù)×100%；臨床妊娠率=臨床妊娠周期數(shù)/移植周期數(shù)×100%；流產(chǎn)率=流產(chǎn)周期數(shù)/移植周期數(shù)×100%；活產(chǎn)率=活產(chǎn)周期數(shù)/移植周期數(shù)×100%；OHSS發(fā)生率=OHSS發(fā)生周期數(shù)/移植周期數(shù)×100%。
5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料符合正態(tài)分布時(shí)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。臨床妊娠的影響因素分析采用二元logistic回歸分析法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果
1. hCG注射日直徑≥14 mm卵泡占比分組各項(xiàng)指標(biāo)的比較：A組的Gn使用時(shí)間與Gn總用量大于B組和C組（P<0.001），但Gn啟動(dòng)劑量低于B組和C組（P=0.026），B組和C組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。hCG注射日雌二醇水平、hCG注射日孕酮水平及獲卵數(shù)隨著hCG注射日直徑≥14 mm卵泡數(shù)占比的增加而增加（P<0.001）。A組2PN受精率小于B組（P=0.013），余組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。3組間可利用囊胚率、胚胎種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率、活產(chǎn)率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；C組的OHSS發(fā)生率顯著大于A組（P=0.008），余組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。
2. 根據(jù)FORT分組各項(xiàng)指標(biāo)的比較：D組的Gn使用時(shí)間與Gn總用量大于E組和F組（P<0.001），F(xiàn)組的Gn啟動(dòng)劑量大于E組和F組（P=0.019）；隨著FORT的增加，hCG注射日雌二醇水平、hCG注射日孕酮水平及獲卵數(shù)隨之增加（P<0.001）；F組2PN受精率明顯低于D組（P=0.009）和E組（P<0.001），D組與E組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；F組胚胎種植率、臨床妊娠率、活產(chǎn)率低于E組（P=0.002、P=0.007、P=0.011），D組與其他兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；F組的OHSS發(fā)生率顯著大于D組（P=0.010），余組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。
3. 妊娠組與未妊娠組臨床及實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)指標(biāo)的比較：妊娠組2PN受精率和可利用囊胚率高于未妊娠組（P=0.041，P<0.001）；未妊娠組FORT高于妊娠組（P=0.031），而hCG注射
日直徑≥14 mm卵泡數(shù)占比組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在年齡、BMI、AFC、獲卵數(shù)等方面，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表3）。
4. 影響臨床妊娠相關(guān)因素的二元logistic回歸分析：以臨床妊娠與否為因變量，校正混雜因素（年齡、AFC、獲卵數(shù)、2PN受精率、可利用囊胚率等）后結(jié)果顯示AFC、可利用囊胚率、FORT對(duì)臨床妊娠的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余指標(biāo)對(duì)臨床妊娠結(jié)局的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表4）。
討論
PCOS不孕患者首要的治療方法是誘發(fā)排卵，當(dāng)通過調(diào)整生活方式與促排卵失敗時(shí)，或當(dāng)患者合并有其他助孕指征時(shí)，可以考慮進(jìn)行IVF治療。由于PCOS患者特殊的內(nèi)分泌紊亂，其對(duì)藥物的反應(yīng)性無法預(yù)測(cè)，在促排卵的過程中容易出現(xiàn)多卵泡發(fā)育、卵子質(zhì)量下降、OHSS等風(fēng)險(xiǎn)，或者對(duì)促排卵藥物不反應(yīng)或卵泡期過長(zhǎng)，提早黃素化等，合適的COH方案及hCG扳機(jī)時(shí)機(jī)至關(guān)重要。本研究分別按hCG注射日直徑≥14 mm卵泡數(shù)占比和FORT分為高、中及低比例組，研究各組對(duì)卵泡期長(zhǎng)效長(zhǎng)方案新鮮胚胎移植妊娠結(jié)局的影響。
先前的研究以及臨床治療中，多采用年齡、AFC、bFSH、抗苗勒管激素（AMH）等指標(biāo)來預(yù)測(cè)卵巢的反應(yīng)性及妊娠結(jié)局，Genro于2011年最早提出了FORT的概念，并將其用之于臨床。Rehman等和Gallot等認(rèn)為，F(xiàn)ORT可以預(yù)測(cè)獲卵數(shù)、胚胎質(zhì)量及妊娠結(jié)局。Hassan等認(rèn)為，F(xiàn)ORT是影響臨床妊娠率的獨(dú)立因素，隨著FORT值增大，獲卵數(shù)和優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)增加，種植率和妊娠率增高。Zhang等認(rèn)為PCOS患者的中比例FORT和非PCOS患者的高比例FORT可以得到更好的妊娠結(jié)局，這與卵巢反應(yīng)異質(zhì)性有關(guān)。本研究顯示妊娠組FORT顯著低于未妊娠組，F(xiàn)ORT高比例組（F組）2PN受精率低于FORT中、低比例組（D和E組），F(xiàn)ORT高比例組（F組）臨床妊娠率及活產(chǎn)率低于FORT中比例組（D組），得知中、低比例的FORT可獲得較好的妊娠結(jié)局。卵巢功能正常的患者竇卵泡數(shù)相對(duì)有限，F(xiàn)SH受體飽和后，產(chǎn)生的雌激素量與之相對(duì)應(yīng)，雌激素分泌高峰維持24 h左右后逐漸下降。PCOS患者的AFC是正?；颊叩?~3倍，Gn刺激大量卵巢顆粒細(xì)胞分泌雌二醇，使其劑量明顯增加，雌激素的分泌在達(dá)到峰濃度之后會(huì)呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)。有學(xué)者認(rèn)為注射hCG前雌激素的下降與卵泡閉鎖或提前黃素化有關(guān)，最終導(dǎo)致低受精率和卵裂率，故妊娠率降低。hCG注射日高濃度雌二醇水平也可能通過影響卵子質(zhì)量、胚胎發(fā)育或子宮內(nèi)膜容受性影響輔助生殖的結(jié)局。以往文獻(xiàn)指出高雌激素患者雖可獲得較多卵子，但會(huì)產(chǎn)生不成熟或過熟卵子，這些卵子受精后分裂不佳，形成低質(zhì)量胚胎；一個(gè)COH周期有過多的卵子發(fā)育成熟，可能使質(zhì)量差的卵子比例增高，導(dǎo)致可利用胚胎率降低。另外高FORT組大卵泡比例增高，當(dāng)卵泡超過一定徑線時(shí)容易出現(xiàn)黃素化和卵母細(xì)胞老化，從而導(dǎo)致卵母細(xì)胞質(zhì)量下降，優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)目減少，并最終影響患者的妊娠結(jié)局。過高的血清雌二醇水平可以改變與著床密切相關(guān)的分子、發(fā)育基因以及子宮內(nèi)膜超微結(jié)構(gòu)的時(shí)序性表達(dá)，使子宮內(nèi)膜組織學(xué)變化與正常生理改變不符，導(dǎo)致腺體發(fā)育和間質(zhì)發(fā)育的不同步，使種植窗的開放與胚泡的發(fā)育不同步，影響胚胎著床，最終影響妊娠結(jié)局。
有研究表明在GnRH-a長(zhǎng)方案中，hCG注射日成熟卵泡比例（≥18 mm/≥10 mm）對(duì)PCOS患者臨床妊娠結(jié)局無影響，延遲hCG扳機(jī)時(shí)間可能會(huì)增加OHSS的風(fēng)險(xiǎn)，這與本研究結(jié)論一致。本研究結(jié)果顯示隨著hCG注射日卵泡直徑≥14 mm數(shù)占比升高，獲卵數(shù)增加，可移植胚胎數(shù)隨之增加，可能會(huì)提高累積妊娠率，但不影響臨床妊娠率和活產(chǎn)率。在COH過程中，使用促排卵藥物刺激多個(gè)卵泡共同發(fā)育，由于每個(gè)卵泡對(duì)FSH的敏感性不同，對(duì)FSH敏感的卵泡逐漸發(fā)育成優(yōu)勢(shì)卵泡，其他卵泡則可能發(fā)育緩慢或逐漸閉鎖。因此hCG注射日監(jiān)測(cè)到的卵泡總數(shù)一般低于AFC，這使hCG注射日直徑≥14 mm卵泡數(shù)占比相較于FORT比例重新分配，得出不一樣的結(jié)論。數(shù)據(jù)分析可見在hCG注射日卵泡直徑占比分組下，各組數(shù)據(jù)差距較FORT分組小，高比例組與FORT中比例組的獲卵數(shù)、臨床妊娠率及活產(chǎn)率相近。得知卵泡直徑占比這種分組方式縮小了組間差異，對(duì)臨床妊娠率和活產(chǎn)率沒有明顯影響。
除了FORT可預(yù)測(cè)妊娠結(jié)局，logistic回歸分析提示AFC與臨床妊娠密切相關(guān)。Holte等的大樣本前瞻性研究結(jié)果顯示PCOS患者助孕治療后的妊娠率及活產(chǎn)率與AFC呈線性正相關(guān)。另有研究表明，PCOS患者的獲卵數(shù)雖然在增加，但卵母細(xì)胞的質(zhì)量較差，從而導(dǎo)致受精率、卵裂率和種植率降低。這可能是因?yàn)槁殉矁?nèi)因素［表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、成纖維生長(zhǎng)因子（FGFs）、胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）家族、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）家族、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）-β家族、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）家族、細(xì)胞因子家族］和卵巢外因素（FSH缺乏、高LH、高雄激素、高胰島素）對(duì)卵母細(xì)胞的成熟和胚胎潛在發(fā)育能力產(chǎn)生負(fù)面影響?；貧w分析還表明獲卵數(shù)與臨床妊娠關(guān)系不大，可能因?yàn)镻COS患者促排卵后能獲得可觀的胚胎數(shù)量，選擇優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)行移植是IVF成功的關(guān)鍵。在IVF過程中，仍要注意把握卵巢刺激的強(qiáng)度，不宜過多或過少，不僅要使患者一次取卵周期獲益最大化，同時(shí)要兼顧胚胎利用率、OHSS風(fēng)險(xiǎn)等方面，制定個(gè)體化的促排卵方案。
目前應(yīng)用于PCOS患者的促排卵藥物及促排卵方案較多。隨著臨床研究的深入，COH方案在長(zhǎng)方案基礎(chǔ)上又衍生出拮抗劑方案、微刺激方案、長(zhǎng)效長(zhǎng)方案、超長(zhǎng)方案等，各個(gè)方案各有其優(yōu)劣勢(shì)。本研究?jī)H選取行卵泡期長(zhǎng)效長(zhǎng)方案降調(diào)節(jié)的患者進(jìn)行研究，其他方案值得進(jìn)一步探討。卵泡期長(zhǎng)效長(zhǎng)方案通過充分降調(diào)節(jié)，更理想地控制了PCOS患者異常激素水平，盡可能使多的卵泡發(fā)育成熟，同時(shí)推遲注射hCG可獲得更多的成熟卵子，發(fā)生黃素化概率低，對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的影響小，但獲卵數(shù)的增多，亦會(huì)增加OHSS的風(fēng)險(xiǎn)［23］。PCOS是發(fā)生OHSS的高危因素之一，目前OHSS缺乏針對(duì)性強(qiáng)的治療方法，預(yù)防尤為重要。對(duì)PCOS患者，應(yīng)當(dāng)減少Gn用量；當(dāng)卵泡近成熟，血清雌激素水平過高時(shí)，可短暫停用Gn，也稱“coasting”；出現(xiàn)嚴(yán)重OHSS傾向時(shí)，可取消周期；減少hCG的扳機(jī)劑量，取卵后禁用hCG進(jìn)行黃體支持等。這些方法都能一定程度降低OHSS的發(fā)生率。阿司匹林、二甲雙胍等藥物的使用也可預(yù)防OHSS的發(fā)生。另外，妊娠導(dǎo)致內(nèi)源性hCG大量分泌，可誘發(fā)加重OHSS的發(fā)生發(fā)展，選擇性的全部胚胎冷凍可以避免因妊娠而引起的遲發(fā)型OHSS。對(duì)于已發(fā)生OHSS的患者，應(yīng)積極對(duì)癥治療，減少嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生，以減輕患者痛苦，最終實(shí)現(xiàn)患者的生育目的。
綜上所述，在PCOS患者中，hCG注射日直徑≥14 mm卵泡數(shù)占比不影響妊娠結(jié)局，F(xiàn)ORT對(duì)于預(yù)測(cè)妊娠結(jié)局具有重要意義，中低比例FORT的患者可有較好的妊娠結(jié)局。本研究?jī)H為回顧性研究，仍有待大樣本、多中心、前瞻性研究進(jìn)一步證實(shí)。
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